Introducción:

El microambiente tumoral (MT) presente en los tejidos linfoides afecta la función de las células inmunes desempeñando un papel clave en la patogénesis de las malignidades hematológicas. Específicamente, en la leucemia linfoide crónica (LLC) se ha descrito la presencia de centros proliferantes que actúan como nichos protectores promoviendo la proliferación tumoral. La estimulación antigénica y la inflamación son eventos claves, comúnmente implicados en el inicio y la progresión leucémica. En línea con esta hipótesis, nuestro grupo propuso una asociación directa entre inflamación y progresión tumoral, mostrando como la sobreexpresión de la proteína S100-A9 en linfocitos leucémicos de pacientes progresores activa la vía NF-kβ causando la proliferación celular (Prieto,et al.,Blood,2017).

Objetivos:

Intentando comprender los mecanismos moleculares subyacentes a este hallazgo fijamos los siguientes objetivos: 1) evaluar la expresión de los receptores de la proteína S100-A9 (CD33, TLR4, RAGE y EMMPRIN) en células leucémicas. 2) Identificar vías de activación molecular responsables de la sobrevida y la proliferación tumoral en pacientes con necesidad de tratamiento.

Metodología:

Se utilizaron muestras de sangre de pacientes con LLC, previa obtención del consentimiento informado y aprobación por el comité de Ética institucional. Las células fueron almacenadas en el BioBanco de LLC del Grupo Uruguayo de LLC y descongeladas para la realización de los experimentos in-vitro. Técnicas de Western-blot, PCR, y citometría de flujo fueron realizadas.

Resultados:

Las células leucémicas presentan altos niveles de expresión de los receptores EMMPRIN y RAGE, y muy baja expresión de TLR4 y CD33. Dado que RAGE une el heterodímero S100A9/S100A8, y EMMPRIN solo el dímero S100-A9 y que nuestros estudios previos identifican solamente la presencia de S100-A9, decidimos focalizarnos en la vía S100A9/EMMPRIN. Nuestros resultados muestran que el clon leucémico expresa EMMPRIN en una forma N-glicosilada y que dicha expresión es significativamente mayor en pacientes progresores, comparando con pacientes indolentes y donantes sanos (n=36; n=28 and n=12, respectivamente). Esta mayor expresión se correlaciona positivamente con la necesidad de un tratamiento más temprano (n=25, r=-0.61; Spearman_rank-test). Interesantemente, la interacción in-vitro de S100A9/EMMPRIN en células LLC, no solo activa NF-kβ, sino también las vías PI3K/AKT y MAPK/JNK kinasas; así como también diferentes genes asociados a ellas, como: CCL3/CCL4, Mcl1, Bcl2, pRb-1 y Survivina. Finalmente, la especificidad de estos resultados fue confirmada mediante el uso de inhibidores específicos para S100-A9 y EMMPRIN.

Conclusiones:

La LLC continua siendo una enfermedad incurable, lo que resalta la importancia de comprender los mecanismos moleculares que promueven la progresión tumoral y/o la resistencia terapéutica. Este trabajo describe por primera vez un nuevo eje de supervivencia/proliferación del clon tumoral en pacientes con necesidad de tratamiento. Nuestros resultados plantean nuevas preguntas sobre el papel de la inflamación en la evolución de la LLC y proponen un nuevo eje terapéutico a explorar en esta neoplasia.

Introducción:

La biopsia de medula ósea (BMO) constituye el patrón oro para detección de infiltración medular por Linfoma No Hodgkin B (LNH B). Es una maniobra invasiva y ocasionalmente mal tolerada por dolor. En la actualidad, gracias al avance de las técnicas diagnósticas contamos con otros estudios capaces de determinar compromiso medular en esta entidad. El inmunofenotipo por citometría de flujo (CF) actualmente es utilizado como complemento de la evaluación citomorfológica. Es capaz de confirmar infiltración linfocitaria clonal con alta sensibilidad, mejorando la tasa de detección de linfoma en hasta un 10%. La tomografía por emisión de positrones (PET-TC) es el estudio de elección para la estadificación inicial de los linfomas que presentan avidez por la 18-fluorodesoxiglucosa. El patrón de captación focal en medula ósea es altamente sugestivo de infiltración y ha demostrado detectar gran número de pacientes con compromiso medular.

Objetivos:

El objetivo de este estudio es determinar la concordancia entre estas tres técnicas diagnósticas, para optimizar su uso y valorar la posibilidad de prescindir de la realización de BMO en la estadificación inicial de los pacientes con LNH B.

Metodología:

Se realizo un estudio unicéntrico, retrospectivo, observacional, en el cual se incluyeron pacientes diagnosticados con LNH B en el periodo comprendido entre 2015- 2022 en el Servicio Médico Integral (SMI).

Resultados:

Se diagnosticaron 111 pacientes con LNH-B. De estos, 101 (90%) contaban con BMO en la valoración inicial, 74 (66,6%) con CF de MO y 44 (39,6%) con PET-TC. Se encontró una correlación entre los resultados de la BMO y CF de 92,8%, entre BMO y PET-TC del 90,1% y entre PET-TC y CF del 89,4%. Cuando se analizó según subtipo histológico, estos niveles de concordancia variaban notablemente. En el LDGCB, la prueba más sensible para identificar compromiso medular fue la CF y el uso en conjunto de la CF y PET-TC diagnosticó al 100% de los pacientes que tenían infiltración medular, lo que superó al uso de la BMO sola. En el Linfoma Folicular, el estudio con mayor sensibilidad fue la BMO, seguido por la CF, observándose un muy bajo rendimiento para el PET-TC.

Conclusiones:

Nuestro estudio reveló que la BMO, la CF de MO y el PET-TC serían pruebas complementarias. En nuestro medio, en los pacientes con LDGCB, el uso combinado de CF y PET-TC demostró ser más sensible que el uso exclusivo de BMO para el diagnóstico de compromiso medular. Por lo tanto, en este subgrupo de pacientes podría prescindirse de la BMO sin detrimento de la estadificación al debut. Por otro lado, la BMO sigue siendo el estudio de elección en pacientes con LNH-B indolentes.

Introducción:

La respuesta inmune innata tendría un papel en la progresión de la Leucemia Linfoide Crónica (LLC): la estimulación antigénica y la inflamación constituyen eventos involucrados en el inicio y la progresión de la enfermedad, sin embargo, el papel del inflamasoma, el complejo multiproteico que conduce a la maduración y secreción de IL-1b, en la LLC no está caracterizado. Los canales catiónicos TMEM176A/B son reguladores clave del inflamasoma NLRP3 (Hill M,2020). Su bloqueo farmacológico con Boritinib un inhibidor especifico de dichos canales desencadena fuertes respuestas inmunitarias antitumorales dependientes del inflamasoma. (Segovia y Russo,2019).

Objetivos:

Determinar el rol del inflamasoma en la progresión de la LLC y la posibilidad de su modulación farmacológica.

Metodología:

Para los estudios in-vitro se utilizaron células de pacientes almacenadas en el BioBanco del Grupo Uruguayo de LLC, obtenidas luego de firma del consentimiento informado y aprobación del Comité de Ética. Se utilizaron técnicas de citometría de flujo, PCR y Western blot. Para los experimentos in-vivo se utilizaron animales TCL-1 alojados en el Bioterio del IPMont (UBAL).

Resultados:

Nuestros primeros resultados demuestran que la expresión de TMEM176A en células de pacientes con LLC está significativamente aumentada en pacientes progresores en relación a indolentes y donantes sanos. Esto se correlaciona con menor actividad del inflamasoma (menor porcentaje de caspasa-1 activa) y muerte celular por piroptosis, Para evaluar el rol del microambiente en la expresión de TMEM176A, las células LLC se activaron con CD40L/IL4 o CPG/IL15. Los resultados muestran que luego de la incubación con CD40L/IL4, pero no con CPG/L15, se induce la expresión de TMEM176A. Intentando evaluar al inflamasoma como blanco terapéutico, se trataron células de LLC con Boritinib in-vitro constatando activación del inflamasoma , efecto que se pierde frente a un inhibidor de caspasa. Para evaluar el bloqueo del inflamasoma in-vivo, los ratones TCL1 recibieron una transferencia adoptiva i.p de 106 de esplenocitos y luego fueron randomizados a recibir diariamente boritinib, ibrutinib, su combinación o vehículo. Con un seguimiento de 170 días, la mediana de sobrevida de los ratones con el tratamiento combinado no fue alcanzada, siendo de 69 días en los controles y 96-99 días en las monoterapias (p= 0.004).

Conclusiones:

La activación del inflamasoma está afectada en pacientes con LLC y se correlaciona con mayor expresión de la proteína TMEM176A. Nuestros resultados proponen que el aumento de TMEM176A en las células LLC de pacientes progresores está originada por señales del microambiente del tipo T-dependiente, generando la inhibición de la muerte del linfocito tumoral. La descripción de este nuevo mecanismo de sobrevida tumoral y la mejora de sobrevida encontrada en el modelo animal de LLC, nos llevan a proponer al inflamasoma como un blanco terapéutico en el tratamiento de la LLC .

Introducción:

Los Linfomas de células T incluyen un grupo diverso de linfomas que representan el 10% de todos los linfomas no Hodgkin (LNH). A excepción de los linfomas cutáneos, la mayoría de los subtipos presentan un curso agresivo de la enfermedad dando resultados de sobrevida inferiores en general a los linfomas de células B. Los subtipos más frecuentes son el Linfoma T periférico no especificado (NOS), seguido del angioinmunoblástico y linfoma anaplásico de células grandes.

Objetivos:

Describir características demográficas, respuesta a tratamiento, sobrevida global (SG) y sobrevida libre de enfermedad (SLE) en los pacientes llevados a trasplante autólogo de progenitores hematopoyéticos (Auto-TPH) en un centro de Uruguay.

Metodología:

Estudio retrospectivo, observacional, descriptivo de pacientes con diagnóstico de LNH T en los últimos 20 años en el Hospital Británico, que recibieron Auto-TPH.

Resultados:

30 pacientes recibieron Auto-TPH en este periodo. Tipo de LNH T: T-NOS: 12 (40%), angioinmunoblástico: 8 (26.7%), anaplásico ALK--: 5 (16.7%), Anaplásico ALK +: 1 (3.3%), asociado a enteropatía: 4 (13.3%). Sexo masculino: 16 (53.3%), la mediana de edad fue de 59 años (32-71), 20 pacientes (66.7%) en estadios avanzados, 51.8% presentaron síntomas B. El 63% de los pacientes recibió 1 esquema de tratamiento previo al Auto-TCH, un paciente recibió 2 trasplantes. 14 (46.7%) pacientes presentaban respuesta completa (RC) metabólica o radiológica previo al Auto-TCH. 8 (26.7%) pacientes recayeron post Auto-TCH (tabla 1).Respuesta post Auto-TPH: RC: 19 (63.4%), no RC: 11 (36.6%). Con una mediana de seguimiento de 73 meses (IC 95% 8.39 – 137.6). La mediana de SG a 5 años fue del 53% en el total de la población. Extrayendo los pacientes con LNH T asociado a enteropatía la mediana de SG a 5 años fue del 59%. Para los pacientes con LNH T asociados a enteropatía la mediana de SG a 5 años fue 25% (p=0.04). La SG de los pacientes que llegaron al Auto-TCH en RC vs no RC a 5 años fue del 59% y 55%, respectivamente (p=0.60), (figura 1). La SLE para los que tenían RC vs no RC previo al TPH fue 68% y 65%, respectivamente (p=0.30), La SLE global a 5 años fue del 67%.

Conclusiones:

La consolidación con Auto-TPH en primera línea de tratamiento en linfomas T continúa siendo el tratamiento estándar en esta población. Presentamos la experiencia del Hospital Británico donde encontramos una SG a 5 años de 53% en LNH T nodales. Esta SG representa a los LNH T que llegan a recibir un Auto-TPH, no extrapolable a la población total de LNH T. No hallamos diferencia en SG según estuvieran en RC o no previo al TPH. Los pacientes con LNH T asociados a enteropatía a pesar de ser un n bajo, tienen una peor SG, a 5 años de 25%.